روش استاندارد خارجی یک تکنیک تجزیه و تحلیل کمی به طور گسترده در کروماتوگرافی گازی (GC) است. به عنوان یک تامین کننده گاز کروماتوگراف، من به اصول و کاربردهای این روش آشنایی کامل دارم. در این وبلاگ شما را در فرآیند استفاده از روش استاندارد خارجی در کروماتوگرافی گازی از تهیه نمونه تا تجزیه و تحلیل داده ها راهنمایی می کنم.
آشنایی با روش استاندارد خارجی
روش استاندارد خارجی بر این اصل استوار است که سطح پیک یا ارتفاع پیک یک ترکیب در کروماتوگرام با غلظت آن در نمونه متناسب است. برای استفاده از این روش، یک سری محلول استاندارد با غلظت های مشخص از ترکیب هدف تهیه می شود. سپس این استانداردها به کروماتوگرافی گازی تزریق می شوند و نواحی قله یا ارتفاع مربوطه اندازه گیری می شوند. منحنی کالیبراسیون با ترسیم نواحی قله یا ارتفاعات در برابر غلظت های شناخته شده استانداردها ساخته می شود. هنگامی که منحنی کالیبراسیون ایجاد شد، غلظت ترکیب مورد نظر در یک نمونه ناشناخته را می توان با اندازه گیری سطح یا ارتفاع پیک آن و مراجعه به منحنی کالیبراسیون تعیین کرد.
مرحله 1: نمونه و آماده سازی استاندارد
- انتخاب ترکیبات استاندارد: ترکیبات استاندارد خالص را انتخاب کنید که معرف آنالیت های هدف هستند. خلوص استانداردها باید تا حد امکان بالا باشد تا از نتایج دقیق اطمینان حاصل شود. به عنوان مثال، اگر در حال تجزیه و تحلیل ترکیبات آلی فرار (VOCs) هستید، می توانید استانداردهای VOC با خلوص بالا را از تامین کنندگان قابل اعتماد دریافت کنید.
- تهیه راه حل های استاندارد: یک سری محلول استاندارد با غلظت های مختلف تهیه کنید. این کار را می توان با رقیق کردن محلول موجود از ترکیب استاندارد با یک حلال مناسب انجام داد. به عنوان مثال، اگر از یک حلال غیر قطبی مانند هگزان استفاده می کنید، مطمئن شوید که ترکیب استاندارد در آن محلول است. غلظت محلول های استاندارد باید محدوده غلظت مورد انتظار ترکیب هدف را در نمونه های ناشناخته پوشش دهد.
- آماده سازی نمونه: فرآیند آماده سازی نمونه به ماهیت نمونه بستگی دارد. برای نمونه های مایع، در صورت لزوم می توان آنها را مستقیماً پس از رقیق سازی مناسب به دستگاه کروماتوگرافی گازی تزریق کرد. برای نمونه های جامد، ممکن است قبل از تزریق نیاز به استخراج با حلال مناسب باشد. به عنوان مثال، اگر در حال تجزیه و تحلیل نمونه خاک برای آفت کش ها هستید، می توانید آفت کش ها را با یک حلال آلی مانند استون استخراج کنید.
مرحله 2: راه اندازی ابزار
- انتخاب ستون: یک ستون مناسب برای جداسازی ترکیبات هدف انتخاب کنید. ستون باید گزینش پذیری و وضوح خوبی برای آنالیت های مورد نظر داشته باشد. به عنوان مثال، یک ستون مویرگی با یک فاز ثابت خاص را می توان بر اساس قطبیت ترکیبات هدف انتخاب کرد. اگر در حال تجزیه و تحلیل ترکیبات غیر قطبی هستید، یک ستون غیر قطبی مانند یک ستون DB - 1 یا HP - 5 ممکن است مناسب باشد.
- گاز حامل: یک گاز حامل مناسب مانند هلیوم یا نیتروژن انتخاب کنید. سرعت جریان گاز حامل باید برای اطمینان از جداسازی و تکرارپذیری خوب بهینه شود. نرخ جریان را می توان با توجه به ابعاد ستون و نوع آنالیت تنظیم کرد.
- برنامه دما: برنامه دما را برای کروماتوگرافی گازی تنظیم کنید. دمای اولیه، سرعت سطح شیب دار و دمای نهایی باید برای دستیابی به جداسازی خوب ترکیبات بهینه شوند. به عنوان مثال، برای مخلوط پیچیده ای از ترکیبات با نقاط جوش متفاوت، می توان از گرادیان دما برای شستشوی ترکیبات در زمان معقول استفاده کرد.
مرحله 3: تزریق استانداردها
- حجم تزریق: حجم تزریق مناسب برای استانداردها را تعیین کنید. برای اطمینان از نتایج دقیق، حجم تزریق باید برای همه تزریق‌ها ثابت باشد. حجم تزریق رایج برای کروماتوگرافی گازی در محدوده 0.1 تا 10 میکرولیتر است.
- تکنیک تزریق: از یک تکنیک تزریق مناسب مانند تزریق اسپلیت یا بدون شکاف استفاده کنید. تزریق اسپلیت برای نمونه هایی با غلظت بالا مناسب است، در حالی که تزریق بدون تقسیم برای نمونه هایی با غلظت پایین مناسب تر است.
- اجرای استانداردها: هر محلول استاندارد را به دستگاه گاز کروماتوگراف تزریق کرده و کروماتوگرام ها را ثبت کنید. اطمینان حاصل کنید که برای اطمینان از تکرارپذیری، هر استاندارد را حداقل سه بار اجرا کنید. نواحی پیک یا ارتفاع ترکیب مورد نظر را در هر کروماتوگرام اندازه گیری کنید.
مرحله 4: ساخت منحنی کالیبراسیون
- تجزیه و تحلیل داده ها: برای ایجاد منحنی کالیبراسیون از نواحی قله یا ارتفاع استانداردها و غلظت های شناخته شده مربوط به آنها استفاده کنید. برای انجام رگرسیون خطی می توانید از نرم افزار ارائه شده همراه با کروماتوگرافی گازی یا سایر نرم افزارهای تجزیه و تحلیل داده ها استفاده کنید. منحنی کالیبراسیون باید رابطه خطی خوبی داشته باشد، معمولاً با ضریب همبستگی (R²) نزدیک به 1.
- معادله منحنی کالیبراسیون: هنگامی که منحنی کالیبراسیون ساخته شد، معادله خط را به شکل y = mx + b بدست آورید که y مساحت قله یا ارتفاع، x غلظت، m شیب و b نقطه قطع است.
مرحله 5: تجزیه و تحلیل نمونه های ناشناخته
- تزریق نمونه های ناشناخته: نمونه های ناشناخته را با استفاده از همان حجم تزریق و تکنیک استاندارد به دستگاه کروماتوگرافی گازی تزریق کنید.
- اندازه گیری نواحی یا ارتفاعات قله: نواحی پیک یا ارتفاعات ترکیب مورد نظر را در کروماتوگرام نمونه های ناشناخته اندازه گیری کنید.
- تعیین غلظت: از معادله منحنی کالیبراسیون برای محاسبه غلظت ترکیب مورد نظر در نمونه های مجهول استفاده کنید. مساحت پیک اندازه گیری شده یا ارتفاع را در معادله جایگزین کرده و غلظت را حل کنید.
مرحله 6: کنترل کیفیت
- تکرارپذیری: برای اطمینان از قابلیت اطمینان نتایج، نمونه های کنترل کیفیت را در فواصل زمانی معین اجرا کنید. این نمونه ها باید غلظت مشخصی داشته باشند و همانند نمونه های ناشناخته آنالیز شوند. نتایج نمونه های کنترل کیفیت باید در محدوده قابل قبولی قرار گیرد.
- تست های بازیابی: آزمایش های بازیابی را با ریختن مقادیر شناخته شده ترکیب هدف در نمونه ها انجام دهید. نرخ بازیابی را محاسبه کنید که باید نزدیک به 100٪ باشد. اگر میزان بازیابی خارج از محدوده قابل قبول باشد، ممکن است مشکلاتی در تهیه نمونه یا روش آنالیز وجود داشته باشد.
محصولات کروماتوگراف گازی ما
به عنوان یک تامین کننده گاز کروماتوگراف، ما طیف گسترده ای ازتجهیزات کروماتوگرافیبرای رفع نیازهای تحلیلی شما ماکروماتوگرافی گازی GC - 06Eابزاری با کارایی بالا با ویژگی های پیشرفته ای مانند کنترل دقیق دما و آشکارسازهای با حساسیت بالا است. برای کاربردهای مختلف از جمله تجزیه و تحلیل محیطی، ایمنی مواد غذایی و تجزیه و تحلیل دارویی مناسب است.
ماآنالایزر GCیکی دیگر از محصولات عالی است که نتایج دقیق و قابل اعتمادی را ارائه می دهد. کارکرد و نگهداری از آن آسان است و آن را به یک انتخاب محبوب در بین کاربران تبدیل می کند.
برای خرید با ما تماس بگیرید
اگر به محصولات کروماتوگرافی گازی ما علاقه مند هستید و می خواهید در مورد نحوه استفاده از روش استاندارد خارجی در ترکیب با ابزار ما بیشتر بدانید، یا اگر سؤال دیگری در مورد تجزیه و تحلیل کروماتوگرافی گازی دارید، لطفاً برای مشاوره خرید با ما تماس بگیرید. تیم کارشناسان ما آماده کمک به شما در یافتن مناسب ترین راه حل برای نیازهای تحلیلی شما هستند.
مراجع
- مک نیر، اچ ام، و میلر، جی ام (1997). کروماتوگرافی گازی پایه وایلی - بین علوم.
- پول، سی اف (2003). جوهر کروماتوگرافی. الزویر.
